La spectrophotométrie est une méthode d'analyse biochimique permettant le dosage de substance en solution . Elle est basée sur l'absorption de radiation par la substance à analyser . Les radiations sont caractérisées par leur longeur d'onde dont l'unité est le nanomètre .

1. colorimétrie

la colorimétrie est une méthode spectrophotomètrique consistant en l'étude de l'absorption de radiation visible .

La lumière blanche se décompose par passage à travers un prisme : on obtient un spectre d'ondes lumineuses . On dit que la  lumière est polychromatiques et que chaque onde lumineuse est monochromatique .

Chaque onde lumineuse composant le spectre de la lumiére blanche est caractérisée par la longeur d'one spécifique .

Lorsque que l'on éclaire par une lumière blanche une substance , elle apparait colorée si elle renvoie les ondes qu'elle n'absorebe pas . La quantité de lumière absorbée s'appelle l'absorbance

2. relation entre l'absorbance et concentration : loi de Beer - Lambert

Quand un faisceau de lumière monochromatique traverse une solution contenue dans une cuve transparente à une longueur d'onde donnée , une partie de la lumière est absorbée par la solution et l'autre partie est transmise

De plus l'absorbance dépend de la concentration de la solution et du trajet optique .

La loi de Beer Lambert est valable si et seulement si :

- le faisceau incident est une lumière monochromatique

_ la solution à analyser est limpide

_ la solution à analyser est diluée