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dosage des protéines du blanc d'oeuf par la méthode de biuret
7 Juillet 2009 Consulté 939 fois
travaux pratiques - 1ère STL - Biochimie
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Protocole opératoire

1.Réactifs

- solution étalon de sérum albumine boivine ( SAB ) à 5g/L ( risque biologique )

- solution controle : solution SAB à 2,05g/L ( risque biologique )

- oeuf de poule

- eau physiologique

- réactif de gornall :

sulfate de cuivre pentahydraté ( Xn ; R 22-36/38 ;S22)

tartrate de sodium et de potassium ( S22-24/35 )

hydroxyde de sodium ( C, R35.S26-36/39-45)

iodure de potassium ( Xn , R 42/43 ; S22-36/37 )

2. Mode opératoire

2.1 Préparation d'une solution de blanc d'oeuf

Déterminer la masse du bécher

Casser l'oeuf , séparer le blanc du jaune et recueilli le blanc dans le bécher de masse connue . Mesurer la masse du bécher contenant le blanc d'oeuf .

Dissoudre la blanc d'oeuf avec de l'eau physiologique en évitant de faire de la mousse .Transvaser quantitativement dans une fiole jaugée de 250 mL . Ajuster la fiole au trait de jauge avec de l'eau physiologique .

2.2 Dilution de la solution de blanc d'oeuf

Réaliser une dilution au 1/5 de la solution de blanc d'oeuf dans de l'eau physiologique .

2.3 Réalisation da la gamme d'éatalonnage

A l'aide de la solution étalon de SAB à 5g/L , réalise r une gamme étalon contenant 6 tubes ayant des quantités en protéines allant de 0 à5 mg/tube le protocole ci dessus

Dans un tube à essais , introduire :

_ XmL de la solution étalon

_ ( 1- X mL ) d'eau physiologique

_ 4mL de réactif de Gornall

Attendre 30 min à l'obscurité et lire les absorbances à 540 nm

La coloration est stable plusieurs heures

2.4 Dosages

Réaliser selon le meme protocole que la  gamme étalon , les dosages de la solution controle et de la solution blanc d'oeuf diluée en utilisant les prises d'essais suivantes :

2 essais sur 1 mL de soltuion contorle ( C1 ; C2)

2essais sur 1mL de soltuion de blanc d'oeuf dilu"e au 1/5(E1 , E2 )

 

 

 

 

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